革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時(shí)間過短，革蘭氏陰性菌也會(huì)被染成革蘭氏陽性菌。脫色時(shí)間的長(zhǎng)短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴(yán)格規(guī)定。
重鏈和輕鏈的N端的氨基酸排列順序因各種抗體而異，稱為可變區(qū)，分別用VH和VL表示。兩者構(gòu)成抗體的抗原結(jié)合部位，只與相應(yīng)的抗原決定簇匹配，發(fā)生特異性結(jié)合，是抗體專一性結(jié)合抗原的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)
培養(yǎng)基的選擇應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料和檢驗(yàn)?zāi)康膩泶_定。目前國(guó)標(biāo)方法中使用的培養(yǎng)基有：馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)、孟加拉培養(yǎng)基(RBC)、高鹽察氏培養(yǎng)基(CAO)，其中PDA和RBC適合于一般的霉菌和酵母菌生長(zhǎng)，而CAO則適合于高滲性霉菌生長(zhǎng)，酵母菌幾乎不長(zhǎng)。
CFU的計(jì)量方式與直接計(jì)數(shù)菌體數(shù)量不同，它專門計(jì)算能夠在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成菌落的活細(xì)菌。理論上，一個(gè)活細(xì)菌在適宜條件下可以形成一個(gè)菌落，但實(shí)際上，由于細(xì)菌可能吸附在微小顆粒上或粘連在一起，多個(gè)細(xì)菌可能共同形成一個(gè)菌落。因此，CFU并不等同于細(xì)菌的實(shí)際數(shù)量，而是一種基于能夠形成可見菌落的活細(xì)菌的估算值。
甘油本身具有吸濕性，其大量羥基結(jié)合水分子，?降低了溶液中的“自由水”含量?，即降低了水活度。較低的水活度本身就不利于許多生化反應(yīng)和微生物活動(dòng)（即使在未凍結(jié)狀態(tài)下），這有助于在冷凍前和部分解凍狀態(tài)下保持菌種的穩(wěn)定性。
培養(yǎng)基在使用之前必須進(jìn)行滅菌處理，將其所含活菌全部殺死或全部除去。常用的滅菌方法有過濾除菌、干熱滅菌、濕熱滅菌及輻照滅菌等。其中，濕熱滅菌法又包括四種方式:煮沸法、流動(dòng)蒸汽滅菌法、間歇滅菌法和壓力蒸汽滅菌法。通常來說，使用比較多的是壓力蒸汽滅菌法。
在微生物限度檢測(cè)中遇到樣品不完全溶解的情況時(shí)，應(yīng)通過樣品預(yù)處理、選擇合適的溶劑和過濾膜、優(yōu)化過濾過程以及其他措施來解決問題。同時(shí)，需要不斷驗(yàn)證和調(diào)整方法，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
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